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자원처리과정

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동결조직 (Frozen tissue)

  1. 가. 적출 120분 이내 조직은 인체유래물등의 기증동의서 확인 후 DB에 접수한다.
  2. 나. 접수된 검체를 2ml의 멸균된 냉동튜브(cryovial)의 표면에 바코드 표식이 되어있는 라벨을 붙인다.
  3. 다. 이 용기에 종양조직과 정상조직 각각 0.2g정도의 조직절편을 1vial에 1-2개씩 넣는다.
         (종양과 정상조직은 같은 vial수로 제작하며, 종양의 크기에 따라 Cryovial 최대6개를 제작한다.
         검체크기가 큰 경우에는 남은 조직을 OCT블록으로 제작한다.)
  4. 라. 이 용기를 그대로 이동용 액체 질소(-196℃)에 넣는다.

혈액 (blood)

  1. 가. 수술을 시행한 환자의 혈액은 citrate tube에 2개씩(약 5cc 내외) 채취한다.
  2. 나. 채취된 혈액은 즉시 BRC로 보내거나 조직과 함께 병리과 접수실로 운반되어야 한다.
  3. 다. BRC DB에 접수된 혈액 2개를 4℃, 3000rpm(1,900g)/10min 원심 분리한다.
  4. 라. 상층의 plasma 1.5ml를 따서 EP tube에 넣은 후 4℃에서 13,100rpm(16,000g)/10min
         원심 분리한다.
  5. 마. Plasma가 제거된 citrate tube에서 Buffy coat 200㎕씩 따서 vial(x1)에 넣는다.
  6. 바. 라.에서 원심 분리된 plasma의 상층부 약 1ml를 따서 vial(x1)에 넣는다.
  7. 사. 보관용 냉동튜브(cryovial)에 바코드 라벨을 부착시킨다.
  8. 아. 액체질소 탱크(LN2 tank, -196℃)에 보관한다.(총 2vial= plasma 1vial+ buffy coat 1vial)

Bone-Marrow (leukemia blood)의 보관방법

  1. 가. 50ml conical tube에 10ml Histopaque를 넣는다.
  2. 나. 5-10ml Histopaque 상층에 동량의 Whole blood를 넣어 층을 만든다.
  3. 다. 1800rpm Centrifuge (30min/RT)
  4. 라.원심분리 후 불투명한층을 tube에 넣고 새로운 Conical Tube에 Pasteur pipet을 이용하여
         담는다.
  5. 마. 1500rpm Centrifuge (5min/4℃)
  6. 바. RPMI1640(10ml)으로 넣는다 (1500rpm/4℃)
  7. 사. Cell counting (Trypan blue사용)
  8. 아. 1500rpm Centrifuge (5min/4℃)
  9. 자. Cryo-Stock(1X107cell/vial)에 만들어 놓은 Cryo-buffer(FBS_9 : DMSO_1)를 추가하여
         Isopropanol tank에 넣어서 -80℃ O/N 진행한다.
  10. 차. 액체질소 탱크(LN2 tank, -196℃)에 보관한다. (cell양에 따라 vial수 정함)